1- Tính toán số lượng microwell mong muốn.
túi nhựa có thể đóng lại, niêm phong và lưu trữ ở 2-8 °C để sử dụng sau này.
2- Thêm bộ hiệu chuẩn và mẫu:
2. 1 Giếng trống: Không thêm chất phản ứng.
2. 2 Các giếng hiệu chuẩn: Thêm 100 μL các giếng hiệu chuẩn vào các giếng điều khiển được chỉ định.
2.3 Các giếng thử nghiệm: Thêm 100 uL chất pha loãng mẫu vào các giếng thử nghiệm, sau đó thêm 10 uL mẫu trong giếng tương ứng.
2.4 Xúc nhẹ tấm trong 20 giây, sau đó che tấm bằng chất niêm phong.
3. ủ: ủ đĩa ở nhiệt độ 37 °C trong 30 phút.
4. bước rửa (có thể được thực hiện bằng tay hoặc với rửa tự động):
Rửa bằng tay: Cẩn thận loại bỏ hỗn hợp ủ bằng cách vứt dung dịch vào thùng rác.
bôi 350 μL chất đệm rửa đã pha loãng và lắc nhẹ nhàng trong 20-30 giây.
Sau khi hoàn thành bước rửa cuối cùng, nhấn tấm trên giấy hấp thụ để loại bỏ chất lỏng còn lại.
Rửa tự động: Máy rửa đĩa tự động phải được hiệu chỉnh để đảm bảo rửa hiệu quả.
pha trộn bơm rửa và ngâm trong 20-30 giây. hít tất cả các giếng hoàn toàn. lặp lại 4 lần nữa.
5. kết hợp: Thêm 100 μL kết hợp vào mỗi giếng ngoại trừ giếng trống.
6ủ: ủ các giếng và ủ ở 37 °C trong 30 phút.
7Bước rửa: Rửa đĩa 5 lần như mô tả trong bước 4.
8. Substrate: Thêm 50 μL của Substrate A và 50 μL của Substrate B vào mỗi giếng, bao gồm cả Giếng trống.
Microwell trong 20 giây. ủ ở 37 °C trong bóng tối trong 15 phút.
9. Giải pháp dừng: Thêm 50 μL giải pháp dừng vào mỗi giếng. Một màu vàng nên phát triển trong các giếng chứa mẫu dương tính.
10Đọc kết quả: Đọc ở 450/630-700 nm trong vòng 30 phút.
1Lưu ý: Microplate cũng có thể được đọc ở 450 nm, nhưng nó được khuyến cáo mạnh mẽ để đọc nó ở 450/630-700 nm cho
kết quả tốt hơn.
Chronometry: Đọc mật độ quang học (OD) của mẫu ở 450nm bằng máy đọc đĩa vi mô.
Giá trị OD trung bình của kiểm soát âm ≤ 0,1 và giá trị OD trung bình của kiểm soát tích cực ≥ 0.8, thử nghiệm là hợp lệ,
Nếu không, xét nghiệm không hợp lệ.
Giá trị cắt (CO) = Giá trị OD trung bình của kiểm soát âm x 3 (Được tính bằng 0,10 khi giá trị trung bình
Giá trị OD của kiểm soát âm là < 0.10, được tính bằng giá trị thực tế khi kiểm soát âm trung bình OD
Vietnamese
