Bộ xét nghiệm Elisa LH ISO13485 Luteinizing Hormone Test Kit 96 chiếc

LH Elisa Kit Luteinizing Hormone

1. Mục đích sử dụng

Xét nghiệm miễn dịch để xác định định lượng in vitro của hormone tạo hoàng thể trong huyết thanh người.

2. Tóm tắt

• LH (hormone tạo hoàng thể), cùng với FSH (hormone kích thích nang trứng), thuộc họ gonadotropin.LH và FSH điều hòa và kích thích sự tăng trưởng và chức năng của tuyến sinh dục (buồng trứng và tinh hoàn) hiệp đồng.Như FSH, TSH và hCG, LH là một glycoprotein bao gồm hai tiểu đơn vị (chuỗi α- và β).(1, 2, 3) Proteohormone này, bao gồm 121 axit amin và ba chuỗi đường, có trọng lượng phân tử là 29500 dalton.Ở phụ nữ, gonadotropins hoạt động trong mạch điều hòa vùng dưới đồi-tuyến yên-buồng trứng để kiểm soát chu kỳ kinh nguyệt.
• LH và FSH được giải phóng theo xung từ các tế bào tuyến sinh dục của thùy trước tuyến yên và đi qua đường máu đến buồng trứng.Tại đây các gonadotropins kích thích sự phát triển và trưởng thành của nang trứng và do đó sinh tổng hợp các estrogen và progesteron.Nồng độ LH cao nhất xảy ra trong thời kỳ đỉnh điểm giữa chu kỳ và gây ra sự rụng trứng và hình thành thể vàng, sản phẩm bài tiết chính của nó là progesterone.Trong tế bào Leydig của tinh hoàn, LH kích thích sản xuất testosterone.Xác định nồng độ LH được sử dụng để làm sáng tỏ các rối loạn chức năng trong hệ thống tuyến sinh dục dưới đồi - tuyến yên.Việc xác định LH kết hợp với FSH được sử dụng cho các chỉ định sau: bệnh bẩm sinh có sai lệch nhiễm sắc thể (ví dụ như hội chứng Turner), buồng trứng đa nang (PCO), làm rõ nguyên nhân của vô kinh, hội chứng mãn kinh và nghi ngờ suy tế bào Leydig.(1, 4, 5)

3. Nguyên tắc kiểm tra

Nguyên tắc bánh mì sandwich.Tổng thời gian khảo nghiệm: 80 phút.

• Mẫu, vi vi phủ Anti-LH và enzyme có nhãn Anti-LH được kết hợp với nhau.

• Trong quá trình ủ, LH có trong mẫu được phép phản ứng

đồng thời với hai kháng thể, dẫn đến các phân tử LH là

kẹp giữa pha rắn và các kháng thể liên kết với enzym.

• Sau khi rửa, một phức hợp được tạo ra giữa pha rắn, LH trong mẫu và các kháng thể liên kết với enzym bằng các phản ứng miễn dịch học.

• Dung dịch nền sau đó được thêm vào và xúc tác bởi phức chất này, dẫn đến phản ứng tạo màu.Phản ứng tạo màu thu được được đo như độ hấp thụ.

• Độ hấp thụ tỷ lệ với lượng LH trong mẫu.

Thuốc thử

Vật liệu cung cấp

• Microplate tráng, 8 x 12 dải, 96 giếng, được tráng trước bằng chuột đơn dòng

Chống LH.

• Dụng cụ hiệu chuẩn, 6 lọ, mỗi lọ 1 ml, sẵn sàng sử dụng;Nồng độ: 0 (A), 5 (B), 20 (C), 50 (D), 100 (E) và 200 (F) mIU / mL.

• Enzyme Conjugate, 1 lọ, 11 mL HRP (peroxidase từ cải ngựa) được dán nhãn Anti-LH đơn dòng của chuột trong dung dịch đệm Tris-NaCl có chứa BSA (albumin huyết thanh bò).Chứa 0,1% chất bảo quản ProClin300.

• Chất nền, 1 lọ, 11ml, sẵn sàng sử dụng, (tetramethylbenzidine) TMB.

• Dung dịch Dừng, 1 lọ, 6,0 ml axit sulfuric 1 mol / L.

• Dung dịch rửa Cô đặc, 1 lọ, 25 mL (đậm đặc 40 lần), PBS-Tween

dung dịch rửa.

• IFU, 1 bản sao.

• Tấm Nắp: 1 cái.

Vật liệu bắt buộc (nhưng không được cung cấp)

• Đầu đọc vi sóng với khả năng hấp thụ bước sóng 450nm và 620nm.

• Máy giặt Microplate.

• Vườn ươm

4. Quy trình kiểm tra

• Chỉ sử dụng số lượng giếng cần thiết và định dạng giếng của vi mẫu cho

từng mẫu chuẩn và mẫu được thử nghiệm.

• Thêm 25 μL chất hiệu chuẩn hoặc mẫu vào mỗi giếng.

• Thêm 100 μL liên hợp enzyme vào mỗi giếng.

• Lắc nhẹ tấm vi trong 30 giây để trộn đều.

• Đậy nắp đĩa lại và ủ ở 37 ° C trong 60 phút.

• Loại bỏ các thành phần bên trong đĩa vi mô bằng cách gạn hoặc hút.Nếu

gạn, gõ nhẹ và thấm khô đĩa bằng giấy thấm.

• Thêm 350 μL dung dịch rửa, gạn (vòi và thấm) hoặc hút.Lặp lại 4 lần bổ sung cho tổng số 5 lần giặt.Có thể sử dụng máy giặt dải vi tấm tự động.Khi kết thúc quá trình rửa, lật ngược đĩa và đổ hết dung dịch rửa còn sót lại lên giấy thấm.

• Thêm 100 μL chất nền vào mỗi giếng.

• Ủ ở nhiệt độ môi trường (18-25 ℃) trong bóng tối để phản ứng trong 20 phút.Không lắc đĩa sau khi thêm chất nền.

• Thêm 50 μl dung dịch dừng vào mỗi giếng.

• Lắc trong 15-20 giây để trộn chất lỏng trong giếng.Điều quan trọng là

đảm bảo rằng màu xanh chuyển sang màu vàng hoàn toàn.

• Đọc độ hấp thụ của mỗi giếng ở bước sóng 450 nm (sử dụng 620 đến 630 nm làm

bước sóng tham chiếu để giảm thiểu sự không hoàn hảo của giếng) trong đầu đọc tấm vi mô.