Human Free Heme RUO ELISA Assay Kit RESEARCH Chỉ sử dụng để chẩn đoán y tế

Mục đích:

Bộ dụng cụ này cho phép xác định nồng độ heme tự do trong máu nguyên chất.

Nguyên tắc xét nghiệm

Bộ kiểm tra mức heme tự do của con người trong mẫu, sử dụng kháng thể heme tự do của con người tinh khiết để phủ lớp vỏ microtiter, tạo ra kháng thể pha rắn, sau đó thêm heme tự do vào các vỏ,Kháng thể heme tự do kết hợp có nhãn HRP, trở thành kháng thể - kháng nguyên - enzyme - phức tạp kháng thể, sau khi rửa hoàn toàn, Thêm TMB dung dịch chất nền, TMB chất nền trở thành màu xanh lá cây tại HRP enzyme-động cơ,Phản ứng được kết thúc bằng cách thêm dung dịch axit lưu huỳnh và sự thay đổi màu được đo quang phổ ở bước sóng 450 nmNồng độ Heme tự do của con người trong các mẫu sau đó được xác định bằng cách so sánh OD của các mẫu với đường cong tiêu chuẩn.

Các thông số kỹ thuật:

Vật liệu được cung cấp cùng với bộ:

Yêu cầu về mẫu

• Chất liệu này được lấy càng sớm càng tốt sau khi thu thập mẫu vật và theo các tài liệu có liên quan, và nên được thử nghiệm càng sớm càng tốt sau khi lấy.mẫu có thể được giữ ở -20 °C để bảo quảnTránh lặp lại chu kỳ đông-nước.
• Không thể phát hiện các mẫu có chứa NaN3, bởi vì NaN3 ức chế HRP hoạt động.

Quy trình kiểm tra

• Loãng và thêm mẫu:Loãng tiêu chuẩn mật độ ban đầu như bảng sau:

2. thêm mẫu: Thiết lập các giếng trống riêng biệt (giếng so sánh trống không thêm mẫu và phản ứng HRP-Conjugate, khác mỗi bước hoạt động là giống nhau). thử nghiệm mẫu giếng.Thêm 50μl tiêu chuẩn vào Microelisa stripplate, thêm mẫu pha loãng 40μl vào giếng mẫu thử nghiệm, sau đó thêm mẫu thử nghiệm 10μl (số mẫu pha loãng cuối cùng là 5 lần), thêm mẫu vào giếng, không chạm vào tường giếng càng xa càng tốt, và trộn nhẹ nhàng.

3ủ: Sau khi đóng tấm bằng màng tấm đóng, ủ trong 30 phút ở 37 °C.

4Thiết lập chất lỏng: dung dịch rửa 30 lần (hoặc 20 lần) pha loãng 30 lần (hoặc 20 lần) với nước cất và dự trữ.

5. Rửa:Mở ra màng tấm đóng, vứt chất lỏng, khô bằng cách lắc, thêm bơm đệm rửa vào mỗi giếng, vẫn còn trong 30s sau đó thoát nước, lặp lại 5 lần, khô bằng cách vỗ.

6Thêm enzyme: Thêm phản ứng HRP-Conjugate 50μl vào mỗi giếng, ngoại trừ giếng trống.

7.mở lò: Hoạt động với 3.

8. rửa: Hoạt động với 5.

9Màu sắc: Thêm Chromogen Solution A 50ul và Chromogen Solution B 50ul vào mỗi giếng, tránh bảo quản ánh sáng trong 10 phút ở 37 °C

10. Ngừng phản ứng: Thêm giải pháp dừng50μl vào mỗi giếng, Ngừng phản ứng ((màu xanh thay đổi sang màu vàng).

11. kiểm tra: lấy giếng trống bằng không, đọc độ hấp thụ ở 450nm sau khi thêm dung dịch dừng và trong vòng 15 phút.

Tính toán

Hãy lấy mật độ tiêu chuẩn như ngang, giá trị OD cho dọc, vẽ đường cong tiêu chuẩn trên giấy biểu đồ,Tìm mật độ tương ứng theo giá trị OD mẫu bằng đường cong mẫu, nhân với số lần pha loãng, hoặc tính toán phương trình hồi quy đường thẳng của đường cong tiêu chuẩn với mật độ tiêu chuẩn và giá trị OD,với giá trị OD mẫu trong phương trình,tính mật độ mẫu, nhân với hệ số pha loãng, kết quả là mật độ thực tế mẫu.