Chuột Estradiol Elisa Kit Bộ thử nghiệm Rat E2 RUO 48 giếng và 96 giếng

Rat Estradiol, Bộ ELISA E2

Ghi chú:

• Việc chiết mẫu và xét nghiệm ELISA nên được thực hiện càng sớm càng tốt sau khi thu thập mẫu.Các mẫu phải được chiết xuất theo các tài liệu liên quan.Nếu không thể thực hiện xét nghiệm ELISA ngay lập tức, các mẫu có thể được bảo quản ở -20 ℃. Nên tránh các chu kỳ đông lạnh-rã đông lặp lại.
• Bộ dụng cụ của chúng tôi không thể được sử dụng cho các mẫu có NaN3 có thể ức chế hoạt động của HRP.

Vật liệu được cung cấp kèm theo bộ

Thủ tục

Pha loãng các chất chuẩn

1.Ten giếng được thiết lập cho các tiêu chuẩn trong dải Microelisa.Trong Giếng 1 và Giếng 2, dung dịch chuẩn 100μl và dung dịch đệm pha loãng tiêu chuẩn 50μl được thêm vào và trộn đều.Trong Giếng 3 và Giếng 4, dung dịch 100μl từ Giếng 1 và Giếng 2 được thêm vào tương ứng.Sau đó, 50μl dung dịch đệm pha loãng chuẩn được thêm vào và trộn đều.Dung dịch 50μl được loại bỏ từ Giếng 3 và Giếng 4. Trong Giếng 5 và Giếng 6, dung dịch 50μl từ Giếng 3 và Giếng 4 được thêm vào tương ứng.Sau đó, 50μl dung dịch đệm pha loãng chuẩn được thêm vào và trộn đều.Trong Giếng 7 và Giếng 8, dung dịch 50μl từ Giếng 5 và Giếng 6 được thêm vào tương ứng.Sau đó, 50μl dung dịch đệm pha loãng chuẩn được thêm vào và trộn đều.Trong Giếng 9 và Giếng 10, dung dịch 50μl từ Giếng 7 và Giếng 8 được thêm vào tương ứng.Sau đó, 50μl dung dịch đệm pha loãng chuẩn được thêm vào và trộn đều.Dung dịch 50μl được loại bỏ từ Giếng 9 và Giếng 10. Sau khi pha loãng, tổng thể tích trong tất cả các giếng là 50μl và các nồng độ là 120 pg / ml, 80 pg / ml, 40 pg / ml, 20 pg / ml và 10pg / ml , tương ứng

2. Trong dải Microelisa, để trống một ô trống như điều khiển trống.Trong các giếng mẫu, 40μl đệm pha loãng mẫu và 10μl mẫu được thêm vào (hệ số pha loãng là 5).Mẫu phải được chất xuống đáy mà không chạm vào thành giếng.Trộn đều với lắc nhẹ.

3. Ủ: ủ 30 phút ở 37 ℃ sau khi đậy kín bằng màng đậy nắp.

4. Pha loãng: pha loãng đệm rửa đậm đặc với nước cất (30 lần đối với 96T và 20 lần đối với 48T).

5. Rửa: cẩn thận bóc lớp màng ngăn nắp, hút và đổ đầy dung dịch rửa.Đổ bỏ dung dịch rửa sau khi để yên trong 30 giây.Lặp lại quy trình giặt trong 5 lần.

6. Thêm 50 μl thuốc thử HRP-Conjugate vào mỗi giếng ngoại trừ giếng đối chứng trắng.

7. Ủ như mô tả ở Bước 3.

8. Rửa như mô tả trong Bước 5.

9. Tạo màu: Thêm 50 μl Dung dịch Chromogen A và 50 μl Dung dịch Chromogen B vào mỗi giếng, lắc nhẹ và ủ ở 37 ℃ trong 15 phút.Vui lòng tránh ánh sáng trong quá trình tô màu.

10. Kết thúc: thêm 50 μl dung dịch dừng vào mỗi giếng để kết thúc phản ứng.Màu sắc trong giếng chuyển từ xanh lam sang vàng.

11. Đọc độ hấp thụ OD ở bước sóng 450nm bằng đầu đọc đĩa siêu nhỏ.Giá trị OD của giếng điều khiển trống được đặt bằng 0.Thử nghiệm nên được thực hiện trong vòng 15 phút sau khi thêm dung dịch dừng.

Độ chính xác

Độ chính xác trong khảo nghiệm (Độ chính xác trong một cuộc khảo nghiệm): 3 mẫu có E2 cấp thấp, trung bình và cao được kiểm tra 20 lần tương ứng trên một đĩa.

Inter-assay Precision (Độ chính xác giữa các lần xét nghiệm): 3 mẫu có E2 cấp thấp, trung bình và cao được thử nghiệm trên 3 đĩa khác nhau, 8 lần lặp lại trong mỗi đĩa.

CV (%) = SD / meanX100

Thử nghiệm nội bộ: CV <10%

Thử nghiệm giữa các kỳ: CV <12%

Phạm vi khảo nghiệm

1,8 pg / ml -150 pg / ml