Yếu tố hoại tử khối u của chuột Bộ công cụ Alpha Elisa cho Tnf Alpha 48 Wells

Yếu tố hoại tử khối u ở chuột α, Cachectin, TNF, TNFSF2, TNF-α ELISA KIT

Vật liệu được cung cấp kèm theo bộ

Nguyên tắc

Bộ ELISA này sử dụng Sandwich-ELISA làm phương pháp.Microelisa stripplate được cung cấp trong bộ dụng cụ này đã được phủ sẵn một loại kháng thể đặc hiệu choTNF-α.Các chất chuẩn hoặc mẫu được thêm vào các giếng Microelisa stripplate thích hợp và kết hợp với kháng thể cụ thể.Sau đó là Horseradish Peroxidase (HRP) - kháng thể liên hợp đặc hiệu choTNF-αđược thêm vào từng dải Microelisa tốt và được ủ.Các thành phần tự do bị rửa trôi.Dung dịch chất nền TMB được thêm vào mỗi giếng.Chỉ những giếng có chứaTNF-αvà kháng thể thrombomodulin liên hợp HRP sẽ có màu xanh lam và sau đó chuyển sang màu vàng sau khi thêm dung dịch dừng.Mật độ quang học (OD) được đo bằng phương pháp quang phổ ở bước sóng 450 nm.Giá trị OD tỷ lệ với nồng độ củaTNF-α.Bạn có thể tính toán nồng độ củaTNF-αtrong các mẫu bằng cách so sánh OD của các mẫu với đường chuẩn.

Ghi chú:

• Bảo quản bộ dụng cụ ở 4 ° C sau khi nhận. Bộ dụng cụ phải được cân bằng với nhiệt độ phòng trước khi xét nghiệm.Lấy bất kỳ dải không cần thiết nào ra khỏi đĩa Tráng kháng thể TNF-α, đậy chúng lại trong giấy bạc có khóa zip và giữ ở 4 ° C.
• Kết tủa có thể xuất hiện trong dung dịch đệm giặt đậm đặc.Hãy đun nóng dung dịch đệm để hòa tan hết kết tủa, điều này sẽ không ảnh hưởng đến kết quả.
• Nên sử dụng pipet chính xác để tránh sai số thí nghiệm.Các mẫu phải được thêm vào Microplate trong vòng chưa đầy 5 phút.Nếu một số lượng lớn mẫu được bao gồm, nên dùng pipet nhiều kênh.
• Đường cong chuẩn phải được bao gồm trong mọi thử nghiệm.Nhân rộng các giếng được khuyến khích.Nếu giá trị OD của mẫu lớn hơn giếng đầu tiên của chất chuẩn, vui lòng pha loãng mẫu (n lần) trước khi thử nghiệm.Khi tính toán nồng độ thrombomodulin ban đầu, vui lòng nhân với tổng hệ số pha loãng (XnX5).
• Để tránh lây nhiễm chéo, chất bịt kín Microplate chỉ sử dụng một lần.
• Vui lòng giữ Chất nền tránh xa ánh sáng.
• Tất cả các hoạt động phải tuân thủ nghiêm ngặt hướng dẫn của nhà sản xuất.Kết quả được xác định bởi Microtiter Plate Reader.
• Tất cả các mẫu, đệm giặt và chất thải phải được coi là tác nhân lây nhiễm.
• Thuốc thử từ các lô khác nhau không được trộn lẫn.

Nồng độ đã biết của TNF-a Standard và OD đọc tương ứng của nó được vẽ trên thang log (trục x) và thang log (trục y) tương ứng.Nồng độ TNF-a trong mẫu được xác định bằng cách vẽ đồ thị OD của mẫu trên trục Y.Nồng độ ban đầu được tính bằng cách nhân hệ số pha loãng.